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對(duì)于顯色液的使用你做的正確嗎？看這里
更新時(shí)間：2020-09-26 點(diǎn)擊次數(shù)：2905次
顯色液是一種采用了較新單一溶液顯色技術(shù)，通過(guò)辣根過(guò)氧化物酶(HRP)催化TMB顯色，用于ELISA等的顯色液。本顯色液也可以用于檢測(cè)血液或血紅蛋白等樣品中的過(guò)氧化物酶含量。
通常的顯色試劑由多個(gè)組份組成，必須在使用前進(jìn)行配制，并且容易產(chǎn)生沉淀，使用相對(duì)不太方便，并且也容易導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果不太穩(wěn)定。本顯色液采用了較新的顯色技術(shù)，把所有的相關(guān)試劑全部配制在一個(gè)溶液中，僅由單一溶液組成，簡(jiǎn)化了操作步驟，并且使檢測(cè)結(jié)果更加穩(wěn)定可靠。
顯色液的使用方法：
用適當(dāng)?shù)母蓛羧萜?用純凈水反復(fù)沖洗)，倒出適量的單組分TMB顯色液，待達(dá)到室溫后即可使用。
加液：加完HRP結(jié)合物并孵育一定時(shí)間后，用適當(dāng)洗滌液洗板3-5次，每孔加TMB顯色液100ul。 根據(jù)個(gè)人實(shí)驗(yàn)需要，在室溫(15-25℃)或37℃下避光溫育10-30分鐘或更長(zhǎng)時(shí)間，直至顯色至預(yù)期深淺。
終止：加入等體積的1M 鹽酸或硫酸溶液終止反應(yīng)，孔中反應(yīng)液由藍(lán)色變?yōu)辄S色。
讀數(shù)：終止反應(yīng)后30分鐘內(nèi)在450nm處測(cè)定吸光值。
注意：如果出現(xiàn)高的反應(yīng)背景或沉淀，表明TMB底物反應(yīng)過(guò)于強(qiáng)烈。為了避免產(chǎn)生沉淀，可在終止后馬上讀數(shù)；或者進(jìn)一步稀釋一抗和/或HRP結(jié)合物。
