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1.將苯酚紅溶于冰乙酸，攪拌下加入溴溶于冰乙酸的溶液，攪拌幾分鐘后傾入60℃熱水中，冷卻至室溫，放置過(guò)夜。過(guò)濾，依次用冰乙酸、苯洗滌濾餅，晾干，得溴酚藍(lán)。

2.將酚紅溶于冰乙酸中，加熱至沸，滴加溴溶于冰乙酸中的溶液，黃色固體析出時(shí)，過(guò)濾，用乙酸洗去游離溴，置于空氣中干燥后即得粗品。用冰乙酸或丙酮與冰乙酸混合溶劑重結(jié)晶，得純品溴酚藍(lán)。

3.將酚紅和溴分別溶于醋酸中，制成溶液。先將酚紅醋酸溶液加熱至沸，然后在攪拌下緩慢加入溴的醋酸溶液：當(dāng)酚紅反應(yīng)*且黃色晶體不再析出后，冷卻，過(guò)濾。用少量醋酸洗去結(jié)晶中的游離溴后，用醋酸或丙酮 醋酸進(jìn)行重結(jié)晶，在空氣中干燥得純品溴酚藍(lán)。

配置溴酚藍(lán)指示液。用途：變色范圍：pH2.8-4.6（黃-藍(lán)），酸堿指示劑；非水滴定用指示劑，蛋白電泳染色；病毒化驗(yàn)等 ^[3]  。

將托盤(pán)天平上稱(chēng)取1g溴酚藍(lán)定溶于100ml無(wú)水乙醇中，轉(zhuǎn)移入滴瓶中，貼標(biāo)簽備用。

配western blot用的2*SDS上樣緩沖液需要用到0.1%的溴酚藍(lán)，2-DE中溴酚藍(lán)一般也是配成0.1%母液。實(shí)際上，溴酚藍(lán)在水中的溶解度不高，直接將0.1g溴酚藍(lán)溶于100ml水是有困難的。下面是其較合適的配制方法：

0.05%的溴酚藍(lán)配制方法：取溴酚藍(lán)0.1g，加0.05mol/L氫氧化鈉溶液3.0ml使溶解，再加水稀釋至200ml，即得。 變色范圍pH2.8～4.6（黃→藍(lán)綠）。只是不知道加入NaOH會(huì)不會(huì)影響2-DE實(shí)驗(yàn)。估計(jì)影響不大，因?yàn)橹甘緞┯昧慨吘购苌佟?/div>